Search :
Project
Project Title :
การโคลนและผลิตโปรตีนไฟโคไซยานินจากไซยาโนแบคทีเรีย (Cloning and expression of phycocyanin from cyanobacteria)
downloaded 20 times
Researcher Name :
มารินา เกตุทัต-คาร์นส์ (Mariena Ketudat-Cairns)
Abstract :
งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาคุณลักษณะของยีนไฟโคไซยานินของสาหร่ายสีเขียวแกมน้ำเงินในระดับโมเลกุล โดยการโคลนยีนไฟโคไซยานินของสาหร่ายสีเขียวแกมน้ำเงิน Anabaena siamensis TISTR8012 ซึ่งเริ่มจากการสร้างนิวคลีโอไทด์สายสั้นจากการเปรียบเทียบลำดับนิวคลีโอไทด์จาก สาหร่ายสีเขียวแกมน้ำเงิน 7 สายพันธุ์ ได้แก่ Ana. variabilis ATCC 29413, Arthrospira platensis, Spirulina maxima, Ana. kisseleviana, Ana. lemmermannii, Ana. flosaquae และ Ana. planktonica จากนั้นทำการโคลนแอลฟา และบีตา-ไฟโคไซยานินยีนโดยการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอด้วยปฏิกิริยาพีซีอาร์แล้วถ่ายโอนเข้าสู่โคลนนิ่งเวคเตอร์ แล้วถ่ายโอนเข้าสู่เวคเตอร์เพื่อการแสดงออกของโปรตีน เมื่อได้โปรตีนแอลฟา- และบีตา- ไฟโคไซยานิน จึงทำโปรตีนให้บริสุทธิ์โดยการใช้โคบอลต์แอฟฟินิตีโครมาโตรกราฟี แล้วนำโปรตีนที่บริสุทธิ์แล้ว มาทดสอบคุณสมบัติการต้านอนุมูลอิสระโดยวิธี ABTS scavenging ผลการทดลองที่ได้นำเสนอโดยค่า IC50 เปรียบเทียบกับวิตามินอีสังเคราะห์ โดยวิตามินอีสังเคราะห์ โปรตีนแอลฟา- และโปรตีนบีตา- ไฟโคไซยานิน ที่ทำบริสุทธิ์มีค่า IC50 0.4, 13.8 และ18.6 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ Abstract The objectives of this research are to clone, expressed, purified and study phycoyanin properties. Genomic DNA of Anabaena siamensis TISTR8012 was used as a template for apo-αPC and apo-βPC amplification. The primers for apo-αPC and apo-βPC amplification were designed from the alignment of apo-αPC and apo-βPC of Ana. variabilis ATCC 29413, Arthrospira platensis, Spirulina maxima, Ana. kisseleviana, Ana. lemmermannii, Ana. flosaquae and Ana. planktonica. The apo-αPC and apo-βPC genes were amplifies and cloned into pGEM_T easy cloning vector and sequenced. Then, subcloned into pET32a expression vector. The recombinant proteins were expressed in BL21 (DE3) Escherichia coli host cells. The recombinant apo-αPC and apo-βPC fusion proteins were purified using cobalt affinity chromatography. The recombinant proteins were analyzed for antioxidant scavenging property using ABTS scavenging assay compare with synthetic vitamin E, trolox. The results showed that trolox, rTrx_apo-αPC and rTrx_apo-βPC proteins have the IC50 value of 0.4, 13.8 and 18.6 mg/ml, respectively.
Publications :
No
View Publications
Detail
Award/Honor :
Name
Sponsor
Get Date
IRD SEARCH
|
IRD LOGIN